瑞安哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养基

不少小伙伴对于血清的挑选、使用和储存等方面，都有不少疑惑，我们汇总了一些常见问题，并且针对这些问题，给出了相应的建议供大家参考。先来看看关于血清挑选的部分：如何挑选胎牛血清？1、胎牛血清的标准采集血液时间是5-8月龄的未出生胎牛。2、选购时询问是否有检测报告，并注意检测报告中的各类指标。3、注意血清有效期，尽量不买过期血清。4、留心观察相关人员是否专业：血清是否全程冷链运输；是否严格储存在-20℃冰箱中；工作人员对待血清态度如何；能否提供同一批次血清。胎牛血清应该存放在-20℃环境的地方。瑞安哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养基

为什么使用胎儿血清而不是新生儿血清或成人血清？胎儿血清含有较多的生长因子，丙种球蛋白（即抗体）含量较低，非胎儿血清也有。这些很重要，因为生长因子促进细胞存活和增殖，而抗体可以与培养的细胞结合。此外，与成人或新生儿相比，胎儿血清中的补体蛋白（补体）含量较低。这些补体具有溶解培养细胞和干扰免疫测定的不良作用。血清和血浆均来自全血，通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于，凝血蛋白存在于血浆中，但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的，但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此，与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。瑞安哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养基虽然胎牛血清与新生牛血清的成分并不存在很大的差别，可是诸如促细胞生长因子和促贴附因子等组份并不相同。

胎牛血清应该怎么选？血源可追溯性：选择来源安全、可追溯的FBS对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品，科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此，国际血清行业协会（ISIA）实施了供应链可追溯性的行业标准，以确保FBS的质量和安全性。例如，FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录？是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件？这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。产品检测，每款FBS在生产上市之前，必须经过严格的质控检测。质控环节必不可少，以确保上市的血清符合规定合乎规格，而血清产品分析证书（COA）就是FBS质控的重要体现。在COA中，常规的检测指标包括内有害元素、总蛋白、细菌、病毒等，例如我国药典规定，FBS中内有害元素含量应≤10EU/mL，另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。

胎牛血清保存方法：1、需要长期保存的澳洲牛血清，例如澳洲南美胎牛血清，必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶，可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。2、一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现澳洲牛血清有悬浮物，例如澳洲北美胎牛血清中发现有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。胎牛血清在消化过程中提供蛋白酶抑制剂，在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

什么是优良的胎牛血清？外观，好的血清应是透明清亮，土黄色或棕黄色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠。如发现血清浑浊，不透明，含许多沉淀物，说明血清污染或血清中的蛋白质变性；若棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，有溶血现象。总蛋白含量，胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采集血液的牛龄偏大，不是胎牛；数值偏低，表明血清可能掺水了。血红蛋白，标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高；反之，数值越低。pH，国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。胎牛血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均。诸暨类胎牛血清Fetal Bovine Serum （Similar）

需要长期保存的胎牛血清须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。瑞安哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养基

为什么有些血清是热灭活的？如何热灭活？哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激发淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性，因此免疫学应用，培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟，并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确，可使用一个类似大小的瓶子作为对照，对照瓶内放入同等体积的水，并放置一个温度计，在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制，避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。瑞安哺乳动物悬浮和贴壁细胞的培养基

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